心脏是一个坚韧而娇嫩的器官,它的持续跳动确保身体各系统正常运作,而它的任何病症都会影响人体的状态甚至生命。同样地,色谱柱的状态也直接决定了液相色谱分离效果和数据结果的准确性。因此,保持色谱柱的健康稳定至关重要。
样品和流动相中含有的固体颗粒物质或者微生物都会堵塞色谱柱入口端的筛板。当筛板被堵住后,会引起污染物富集,液流不均,不仅会引起柱压的升高也会导致色谱峰型拖尾、变宽,从而使柱效下降。
色谱级别(HPLC级)的,水需要用娃哈哈或者屈臣氏的纯净水。流动相使用前用微孔薄膜过滤。同时还需要超声波除去流动相中因溶解或因混合而产生的气泡(气泡会导致流量不准,基线波动)。
输液泵的磨损、密封圈和管路的老化也会产生一些微小固体颗粒物质,这些固体颗粒物质被流动相带入色谱柱,导致堵塞筛板。所以建议在色谱柱前端加装保护柱,可以轻松又有效保护色谱柱前端的筛板不被堵塞和柱前端的填料不被污染。
一定要看使用说明书。因为色谱柱的使用说明书里面包含了色谱柱日常维护保养的关键内容。1.全新液相色谱柱柱效测试
因为色谱柱属于易耗品,全新的液相色谱柱在使用前,建议按照色谱柱出厂报告中的条件进行色谱柱的性能测试,并将结果保存起来,有利于日后监测色谱柱的损耗情况。更能保证检测结果的准确和稳定。
色谱柱的使用方向(Flow)液相色谱柱通常都是有流向要求的,色谱柱出厂时都会标明色谱柱的使用方向(Flow)。
所以色谱柱的pH应用限制范围最重要,若发生超出pH应用限制范围的情况出现,色谱柱入口处就会塌陷,导致色谱峰异常。5.色谱柱的贮存、冲洗和再生
色谱柱说明书的储存溶液进行保存,柱子不能保存在纯水或含盐水溶液中,否则会引起微生物的滋生。
首次使用时,用纯有机相冲洗30倍柱体积,将泵流速设置为0.1mL/min(或最低设置)并在30分钟内增大至正常流速。
有机相和水相的组成与分析流动相比例相同,但是不含缓冲盐的溶液,过渡20倍柱体积。
再用过渡流动相以1.0mL/min 冲洗色谱柱30倍柱体积,然后保存溶剂冲洗30倍柱体积保存。
不超过四天,按日常维护冲洗至系统基线平稳,保存在纯有机溶剂中,然后确认色谱柱堵头已塞紧。
避免纯水冲洗色谱柱,用纯水短时间之内冲洗色谱柱,通常不会对色谱柱立刻造成较大的损伤,但如果长时间用水冲洗色谱柱则可能会导致固定相流失、固定相塌陷现象和柱效下降。
02 色谱柱的再生色谱柱的再生是指通过一些手段将色谱柱的部分性能恢复。色谱柱是易耗品,通常都是有常规使用的寿命的。跟着时间和进样次数的增加,一些保留性较强的物质会积累在柱头,流动相溶液成分不足以把这些物质洗脱,以致于会出现色谱峰降低,峰宽变大或者“鬼峰”,柱效下降的情况。为了有效地延长色谱柱的常规使用的寿命,建议做必要的再生清洗。下面是实验室常用的色谱柱再生方法,供大家参考。
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